กรรมวิธีการตรวจสอบหายีนเอซีดีที่เกี่ยวข้องกับการผลิตกรดไขมันไม่อิ่มตัวเชิงซ้อน
- ชื่อผู้ประดิษฐ์ ผู้ช่วยศาสตราจารย์ ดร.ธีราวุฒิ ภู่สันติสัมพันธ์, , นางสาวแสงจันทร์ เสนาปิน
- หน่วยงาน คณะวิทยาศาสตร์ประยุกต์, มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าพระนครเหนือ
- เบอร์โทรภายใน 4301
- Email theerawut.p@sci.kmutnb.ac.th, sasithorn.k@sci.kmutnb.ac.th
รายละเอียดผลงาน
กรรมวิธีการตรวจสอบหายีนเอซีดีที่เกี่ยวข้องกับการผลิตกรดไขมันไม่อิ่มตัวเชิงซ้อน
มีขั้นตอนคือ เตรียมอาร์เอ็นเอของยีสต์กลุ่มผลิตไขมัน 2 สายพันธุ์ ได้แก่ อาร์เอ็นเอโรโดสปอร์ริเดียม
โทรูรอยดิส (Rhodosporidium toruloides) และยาร์โรเวีย
ลิโพไลทิก้า (Yarrowia lipolytica) ทำการออกแบบไพรเมอร์ที่จำเพาะกับยีนเอซีดี จำนวน 2 เส้น ได้แก่ไพรเมอร์ชื่อ เอซีดีเอฟ (ACD_F)
และเอซีดีอาร์ (ACD_R) โดยมีส่วนผสมของปฏิกิริยาในหลอดทดสอบประกอบด้วย
อาร์เอ็นเอของโรโดสปอร์ริเดียม โทรูรอยดิส (Rhodosporidium toruloides) และยาร์โรเวีย ลิโพไลทิก้า (Yarrowia lipolytica) ที่มีความเข้มข้น 200 นาโนกรัม โดยใช้สภาวะในการทำปฏิกิริยาทำพีซีอาร์
ดังนี้ 50 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 นาที
จำนวน 1 รอบ 94 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1
นาที จำนวน 1 รอบ ตามด้วย 94 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1 นาที 58 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1 นาที และ 72 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1 นาที จำนวน 40 รอบ และตามด้วย 72 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 5 นาที จำนวน 1 รอบ ตรวจสอบผลผลิตพีซีอาร์ด้วยวุ้น 1.5
เปอร์เซ็นต์ โดยเทียบการเครื่องหมายดีเอ็นเอมาตรฐาน
จากนั้นทำการบริสุทธิ์ผลผลิตดังกล่าวแล้วหาลำดับเบสของยีนเอซีดีในแบบจำลองดังกล่าวเพื่อนำมาวิเคราะห์หาโมทีฟหรือส่วนประกอบของยีนดังกล่าวที่สำคัญที่เกี่ยวข้องกับการผลิตกรดไขมันไม่อิ่มตัวเชิงซ้อน